1. 主要的药敏检测方法及其存在的问题 主要的药敏检测方法及其存在的问题

　　标本可评价率低，仅有40~70％。 实验周期长，需要2周以上 测试药物种类和数量有限 操作繁琐，难以标准化 阳性预测值较低，仅有40～60％ 敏感性较差，最低仅能检测500个细胞 量程较小，有效量程在2.0以内 可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤 人为判断因素较大，难以推广 标本可评价率不高，仅有70～80％ 阳性预测值较低，仅有70～80％ 实验人员接触放射，不利于健康 标本可评价率不高，仅有70～80％ 测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞 对某些药物的测试结果存在假阴性

　　神经母细胞瘤 甲状腺癌 乳腺癌 胰腺癌 胃癌 黑色素瘤 结直肠癌 卵巢癌 肉瘤 肺癌

　　•实体瘤标本 实体瘤标本 •胸腹水 胸腹水 •活检淋巴结标本 活检淋巴结标本

　　1. 1982年，Moyer等首先提出内源性ATP的含量可以反映细胞活性;随 1982年 Moyer等首先提出内源性ATP的含量可以反映细胞活性 等首先提出内源性ATP的含量可以反映细胞活性; Kangas等相继证实生物荧光技术是一种敏感 等相继证实生物荧光技术是一种敏感、 后Kangas等相继证实生物荧光技术是一种敏感、可靠的确定各种 细胞活性的检测方法。 细胞活性的检测方法。 1988年 Sevin首先将此方法用于新鲜肿瘤组织的药敏检测 首先将此方法用于新鲜肿瘤组织的药敏检测， 2. 自1988年，Sevin首先将此方法用于新鲜肿瘤组织的药敏检测，在 欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。 欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。 3 . 1998 年 ，Kurbacher 等人报道了 ATP-TCA 辅助化疗与传统化疗比较 1998年 Kurbacher等人报道了ATP-TCA辅助化疗与传统化疗比较 等人报道了ATP 的临床Ⅱ期试验结果，试验结果表明，ATP-TCA指导的化疗治疗 的临床 Ⅱ 期试验结果 ， 试验结果表明 ， ATP - TCA 指导的化疗治疗 复发性卵巢癌较传统化疗模式更能提高临床疗效， 复发性卵巢癌较传统化疗模式更能提高临床疗效，延长病人总生 存期和无进展生存期。 存期和无进展生存期。 4 . NIH 的 GOG (Gynecologic Oncology Group) 项目组认为 ATP-TCA 是 NIH的 Group)项目组认为 ATP-TCA是 项目组认为ATP 最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目(1998) 最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目(1998)。 5. 至今该技术的临床应用相关文献已有200余篇。 至今该技术的临床应用相关文献已有200余篇。 200余篇 6. 国内尚无该技术产业化的报道。 国内尚无该技术产业化的报道。

　　1. 1998 年 德国 DCS 公司将该技术产业化 ， 并获得国际 ISO 质量评 1998年德国DCS 公司将该技术产业化，并获得国际ISO DCS公司将该技术产业化 ISO质量评 估体系认证， 估体系认证，在欧洲和北美市场获得准入。 2 . 2 0 0 1 年 ， 美 国 全 国 医 疗 保 险 协 会 ( Health Maintenance Organization)认为 Organization)认为，该技术是一项精确和可靠的并能指导医 认为， 生选择用药的 先进技术 ， 建议在全美进行医疗保险赔付 。 目 建议在全美进行医疗保险赔付。 前在加州等6个州已获医疗保险赔付。 3 . 2003 年日本厚生省和保险联合会也认为 ， 该技术是一项 先进 2003年日本厚生省和保险联合会也认为 年日本厚生省和保险联合会也认为，

　　更能明显提高胃肠道肿瘤的治愈率， 更能明显提高胃肠道肿瘤的治愈率 ， 建议该项技术在全国范 围内获得医疗保险赔付。 围内获得医疗保险赔付。

　　因此，ATP-TCA技术是目前最先进的体外药敏技术，该技术敏感，可靠，具有极大的 临床应用价值

　　第二部分 ATP-TCA药敏检测技术及 ATP-TCA药敏检测技术及 质量标准的建立

　　ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测 技术(ATP-TCA)的建立及其 技术(ATP-TCA)的建立及其 临床应用研究

　　第一部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述 第一部分： 生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述 第二部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量 第二部分： 生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量 标准的建立 第三部分： 第三部分：ATP-TCA技术的临床应用研究 技术的临床应用研究

　　在有氧条件下, 荧光酶（ luciferase） 在有氧条件下 , 荧光酶 （ luciferase） 可以催化荧光素 luciferin） 释放出荧光（波长为562nm） 同时ATP 562nm （ luciferin） 释放出荧光 （ 波长为 562 nm） ， 同时 ATP 转变成AMP 所释放的荧光强度与胞内ATP含量呈正相关。 AMP。 ATP含量呈正相关 转变成AMP。所释放的荧光强度与胞内ATP含量呈正相关。 细胞死亡后，胞内ATP迅速水解，而活细胞的ATP ATP迅速水解 ATP含量基 细胞死亡后，胞内ATP迅速水解，而活细胞的ATP含量基 本恒定。因此所测得的荧光强度反映了活细胞的数量。 本恒定。因此所测得的荧光强度反映了活细胞的数量。 比较药物系列浓度对培养细胞的不同抑制率，参照相应 比较药物系列浓度对培养细胞的不同抑制率， 判断指标， 判断指标，从而可以评估该化疗药物对肿瘤细胞的杀伤 效果。 效果。

　　2. ATP生物荧光药敏检测技术的优点: ATP生物荧光药敏检测技术的优点 生物荧光药敏检测技术的优点:

　　敏感性好 可评价率高 快速检测 量程宽 精密度好 结果准确 检测效率高 高通量检测 自动化程度高 稳定性好 可检测最少10个细胞。而其他技术则一般需要500个细胞以上 可检测最少10个细胞。而其他技术则一般需要500个细胞以上 10个细胞 500 标本可评价率在90%以上 标本可评价率在90%以上 90% 完成ATP检测仅需30分钟，而其它方法需1 完成ATP检测仅需30分钟，而其它方法需1～4小时的孵育时间 ATP检测仅需30分钟 检测线孔培养板） 检测线孔培养板） 孔培养板 变异系数（CV）小于10%，在国家标准（10%） 变异系数（CV）小于10%，在国家标准（10%）的范围内 10% 整体预测值为86% 整体预测值为86% 同时动态检测评估化疗药物6 同时动态检测评估化疗药物6个剂量下对肿瘤的杀伤作用 适合96、384、1536孔板检测分析 适合96、384、1536孔板检测分析 96 实验数据计算机软件自动分析， 实验数据计算机软件自动分析，分析结果直观可靠 具备产业化条件

　　热稳定性和发光效率均好的重组酶试剂保证检测的敏感性和可 靠性，满足临床实际工作的需要 靠性，

　　1. 操作简便，可以标准化，便于推广 操作简便，可以标准化， 2. 标本可评价率高 3. 检测Байду номын сангаас感、可靠、客观 检测敏感、可靠、 4. 具备产业化条件

　　ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测 技术概述

　　化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。 30年来 年来， 化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。近30年来，虽 然某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善， 但多数肿瘤， 然某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善 ， 但多数肿瘤 ， 特别是实体瘤疗效仍不理想。 这与肿瘤存在个体差异性， 特别是实体瘤疗效仍不理想 。 这与肿瘤存在个体差异性 ， 以及多重耐药性等因素有关。 以及多重耐药性等因素有关。 因此如何选择有效药物， 因此如何选择有效药物，进行有的放矢的治疗早已成 为化疗界所关注的问题。 为化疗界所关注的问题。